●ウエスタンブロティッングでつかう試薬
1. タンパク質抽出バッファー
0.1 M Tris-HCl (pH 8.0)
0.2 M EDTA
8 M Urea (尿素)
0.2 mM DTT
2. 2X サンプルバッファー
0.1 M Tris-HCl (pH 6.8)
4% SDS (w/v)
12% β-メルカプトエタノール (v/v)
20% グリセリン (v/v)
BPB (青色が付く程度）
3. SDS-PAGEバッファー
Tris 15.15 g
グリシン 72.05 g
SDS 5.0 g
上記を 蒸留水に溶かして 5L にする。
4. ポリアクリルアミドゲル
12.5% ポリアクリルアミドゲル。詳細は省略。
5. ブロッティングバッファー
Tris 3.0 g
グリシン 14.4 g
メタノール 200 ml
蒸留水で総容積 1 L にする。
6. PBS (Phosphate Buffered Saline)
NaCl 8.0 g
KCl 0.2 g
Na2HPO4-12H2O
3.58 g
KH2PO4
0.272 g
蒸留水で総容積 1L にする。
7. ポンソーS 染色液
5% 酢酸 (v/v) に終濃度 1% (w/v)になるように Ponseau-S を溶かす。
8. ブロッキング液
(Western blotting 用) PBST に終濃度 2% (w/v) になるようにスキムミルクを溶かす。
(切片の免疫染色用) PBS に終濃度 1% (w/v) になるようにスキムミルクを溶かす。
9. PBST
PBS に終濃度 0.1% (v/v) になるように Tween 20 を加える。
10. 発色試薬 (今回は True Blue)
KPL 社製品。ペルオキシダーゼの基質。