2018 海洋生命・分子工学実験 II （遺伝子工学的実験法）
5 月 31 日のデータ
SDS-PAGE の結果
5 月 31 日の実習終了後，室温で緩やかに振盪しながら染色をしました。染色は計 1 時間
行いました。染色液は，0.25% クマシー・ブリリアント・ブルー（溶媒は，45% メタノール，
10% 酢酸）です。その後，軽く水洗いして，脱色液（25% メタノール，10% 酢酸，2.5%
グリセリン）に移しました。脱色液につけた状態で 30 分，室温で緩やかに振盪しました。
軽く水洗いした後 10% 酢酸に一晩浸けておきました（振盪はしていません）。これを
透明シートに挟んで，スキャナーで画像にしました。
電気泳動マーカー（M）のバンドは 6 本見えますね。上から順に 120 kDa，90 kDa，48 kDa，
36 kDa，28 kDa，20 kDa です。mCherry が正常に発現したとき，どれだけの分子量になるか，
アミノ酸配列から計算してみましょう。 インターネット上でも，アミノ酸配列を入力すれば
分子量を計算してくれるソフトくらい幾らでもあるでしょう。
例えば Swiss Institute of Bioinformatics が提供しているサイト （ こちら ） とか・・・。
自分の使いやすいサイトを探してみてください。
IPTG (-) と IPTG (+) ではっきりと量に差のあるバンドがありますよね。それが mCherry です。
アミノ酸配列から予想される分子量と，SDS-PAGE 上の “見かけの” 分子量は，一致して
いますか？ もしも，ずれているとしたら，どうしてでしょうね？
各レーンのサンプルは：
1： 米なす（IPTG - ）
2： (ゆ)（IPTG + ）
3： 土井（IPTG - ）
4： 横田（IPTG + ）
5： 上（IPTG - ）
6： 片岡（IPTG + ）
7： 碓井（IPTG - ）
8： 久保田（IPTG + ）
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