まず、皆さんの試料 D （一番左は試料 A ）
次に，電気泳動の後の作業について紹介します。
1． コテを使って,2枚のガラス板の間に隙間を作る。
2． ガラス板の一方を外す。ゲルを破らないように丁寧に。
3． ゲルを破らないようにタッパーに移す。
4． ゲルを染色液にひたす。染色。
5． 余分な染色を脱色する。
１ ２
３ ４
５
染色に使った溶液は以下の通りです。
＊ 染色液： クマシーブリリアントブルー（Coomassie Brilliant Blue: CBBと略す）
45% メタノール（v/v），10% 酢酸（v/v） に対して，CBB の粉を
0.25% （w/v）になるように溶かしたものです。
＊ 脱色液： 25% メタノール（v/v），10% 酢酸（v/v），2.5% グリセリン（v/v） です。
【染色の詳しい手順】
（1） 泳動後のゲルをゲル板から外し，CBB 染色液に浸ける。
（2） 染色時間を短縮するために電子レンジ １ 分くらい加熱。
（急がないなら，シェイカーでゆっくり揺すりながら，室温に 1〜 時間置く。）
（3） 染色液をビンに戻し，ゲルを水道水で洗う （水が青くならなくなるまで）。
（4） 脱色液に浸け，ゆっくり揺すりながら，室温で数時間から一晩置く （バンドが
はっきりと見えてくるまで）。
（5） 10% 酢酸水溶液に浸け，室温で静置する （ゲルのバックグラウンド＝背景の
青い色がすっかり抜けるまで）。
ここからが電気泳動の結果です。
M レーンでは，マーカーを電気泳動しました。各バンドの分子量がいくらかは，
以下の web サイトを参考にしてください。
マーカーの情報は，こちらから。メーカーの HP にとびます。
「Triple-color」の方です。2 本あるオレンジのバンドを目印にしてください。
一番低分子量の 10 kDa を示す緑色のバンドは見えません。※のあたりに
ありますが，今回は見えなくなっています。
※注意！
全てのゲルの写真の中で低分子量の位置に太いバンドがあります。
写真の左右の下端のあたりに「※印」をつけてあります。その「※印」を
つないだ線上にあるバンドです。隣あうレーン同士でつながってしまって
いるので，バンドには見えないですね。全部のレーンで見えてます。
このバンドは，mCherry タンパク質ではありません！
このバンドの正体は，大腸菌からタンパク質を取り出す時に使った
リゾチームという酵素（タンパク質）です。リゾチームで大腸菌の細胞壁を
壊し，大腸菌からタンパク質を取り出しやすくしました。
アフィニティクロマトグラフィーの仕組みを考えれば，リゾチームは mCherry
の精製を邪魔しません。なので，使っても問題ないです。 溶出液 「d」 の
レーンで見えてしまっているのは，使ったリゾチーム量が多すぎて，洗いきれ
なかったことが原因です。なので，「※」位置にバンドがあることについては，
頭を悩ませる必要はありません。それ以外のバンドをよく見ましょう。
もしも，この web ページや授業で手に入れた情報以外で，「考察」のために欲しい
情報があれば，是非問いあわせて下さい（課題の答えは教えてあげませんが，
ヒントになりそうなことは教えてあげます）。
わからないことがあれば，砂長か藤原先生か TA まで，いつでも質問に来てください。