変異タンパクの発現
pQE30-EGFP (mutants) の塩基配列と SDS-PAGE
（2003 年 11 月 14 日）

pQE30 に組み込んだ変異型 EGFP cDNA の塩基配列を 11 月 13〜14 日の実験で調べて
みましたね。まずは、泳動の結果を載せます。残念ながら、一部のサンプルを除いてピークが
読み取れませんでした。必要なら画像をダウンロードしてレポートに使ってください。

WJ （室温培養したクローン）　WJ (RT)

WR （池）　WR (ikeda)

WR （大？）　WR (dai)

YJ　YJ

YR　YR

SR　SR 　　
　この SR は変異を入れた箇所の
　付近です。「C」（青い線）が
　連なっているところが変異導入
　箇所ではないかと思います。



うまく配列が読めたのは以下の 2 サンプルです。

WJ （37℃ で培養した方）：　テキストのみ載せておきます。

TATGAGAGGATCGCATCACCATCACCATCACGGATCCGGTTATGGTCGTAAGAAGCGAC
GACAACGTCGTCGTGGTAAGGTACCCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGG
TGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCG
GCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCG
GCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCT
TCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAG
GCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCG
AGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCA
AGGAGGACGGCAACATCCTGGGACACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCT
ATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACA
TCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAA

SJ：　

GTGGTAAGGTACCCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCC
TGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGG
GCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCG
TGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACC
CCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGG
AGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCG
AGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCA
ACATCCTGGGACACAAGCTGGAGTACAACTACAACCCCCACAACGTCTATATCATGGCCG
ACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCAC

SJ のピークはこんな感じです。
　　SJ

きれいに読めていますね。 pBluescript と比べて、pQE は、大腸菌細胞あたりのプラスミド
の個数が少なく、通常の miniprep では pBluescript ほどきれいに精製できない（ような
気がする）ので、塩基配列がきれいに読めないことが多いです。うまく読めなかった人は
原因をいろいろ考えてみてくださいね（そのためにピークの図を載せましたので、使って
ください）。


次は SDS-PAGE の結果です。
どれが誘導されたタンパクのバンドか、書かなくてもわかりますよね。分子量はアミノ酸配列
から計算した見積もり値と一致していましたか？タンパクが強く誘導されている大腸菌と
ほとんど誘導されていない大腸菌がいますね。原因を考えてみましょう。また、トランスイルミ
ネーターで大腸菌を光らせてみた結果を憶えていますか？（自分のグループに関係した分
くらいは憶えていますよね。）その結果と比較して検討してみてください。また、塩基配列を
読んだ結果とも比較してください。今回は何種類かのデータ、何種類かの大腸菌クローンの
比較をしなければいけません。複雑だし、一部データが揃っていない部分もあり、難しいだろう
と思いますが、よく頭の中を整理してレポートを書いてください。

ゲル No.1

SDS-PAGE ゲル No. 1

M：　分子量マーカー
1. YR(-)　2. YR(+)　3. SR(-)　4. SR(+)　5. WJ-RT(-)　6. WJ-RT(+)　7. WJ37(-)　8. WJ37(+)

ゲル No.2

SDS-PAGE ゲル No. 2

M：　分子量マーカー
1. YJ(-)　2. YJ(+)　3. SJ(-)　4. SJ(+)　5. WR37(-)　6. WR37(+)　7. WR-RT(-)　8. WR-RT(+)


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