● total RNA の抽出/クオリティチェック

　実験の方法は，Chomczynski & Sacchi (1987) が発表した AGPC 法（acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction 法）
を原理とした方法を用いる。ただし，詳細については，使用した市販試薬（RNA iso+ TAKARA社）の説明書に従っている。
　AGPC 法では、強力なタンパク質変性剤を含む水溶液中で細胞を溶かし，フェノール/クロロホルム抽出によってタンパク質を沈殿させる。
そのとき，溶液を酸性にしておくことで，DNA がフェノール/クロロホルム層（下層）に行き， RNA が水層（上層）に溶け込むことを利用して，
RNA を抽出・精製する。RNA iso+ は，細胞の溶解とフェノール/クロロホルム抽出が 1 ステップで作業できるように調合された試薬と予測できる。


★ 結果 ★

-吸光度測定による定量および純度測定
　　測定のために超純水で希釈（ 8 倍希釈）しましたが，器械に希釈率を登録して測定したので，表示の数値が 原液の RNA の濃度になります。

　　以下の値は，機器（バイオフォトメータ）に表示された値である。

. . 値 1 回目 値 2 回目 発生段階 電気泳動量
1 班 濃度 (ug/uL) 0.550 0.557 16 細胞期
(16)		 0.5 ug 計算..
A260/A280 1.77 1.78
2 班 濃度 (ug/uL) 1.067 1.072
A260/A280 1.99 1.98
3 班 濃度 (ug/uL) 1.148 ---- 胞胚期
（B）
A260/A280 1.86 ----
4 班 濃度 (ug/uL) 1.346 1.362
A260/A280 1.81 1.83
5 班 濃度 (ug/uL) 0.808 0.796 原腸胚期
（G）
A260/A280 1.96 1.92
6 班 濃度 (ug/uL) 0.710 0.720
A260/A280 1.92 1.94
7 班 濃度 (ug/uL) 0.078 0.078 プルテウス幼生
（P）.
A260/A280 1.93 1.92
8 班 濃度 (ug/uL) 0.123 0.123
A260/A280 2.00 2.01
. . . . . .

-アガロースゲル電気泳動
　　各グループの total RNA 水溶液をアガロースゲルで電気泳動した。M のレーンで泳動したマーカーは，二重鎖 DNA のマーカーであるため，
　RNA の鎖長を判定する物差しとしては使えないので注意すること。
　　ただし，光の強さ（白くみえる部分）はそこにある核酸の量を反映していると考えてよい。強い光，太いバンドはそれだけ核酸の量が多い。



※ 1，4，5，8 班の RNA から作製した cDNA を RT-PCR の鋳型として使用した


★ レポート作成のポイント

　　実験結果の説明として，上記の吸光度計での測定値と電気泳動写真を使用し，抽出した RNA のクオリティチェック （QC）を自分たちで
やってみてください。
　自分たちの班の RNA の品質を中心に述べるのが基本ですが，他班の結果も材料にして，濃度と電気泳動像のつじつまが合っているか
どうかなど，考察してみてください。A260/A280 とは何なのか？調べてみると一段深い考察ができるかもしれません。


★ 課題１
　　今回の実習でやったアガロースゲル電気泳動では，TAE バッファーにアガロース（1% w/v）を溶かして，型に流し込み，冷やして固めたゲルを使い，
TAEバッファー中で電気泳動しました。しかし，この方法では，RNA を正しく鎖長ごとに分離することができません。
　　
　　そこで，この課題では，，「正しい方法」を自学で理解してもらいます。RNA をゲル電気泳動で分離する正しい方法について，説明してください。
　ただし，「○×○×法」のように単語で答えるのではなく，RNA の性質などについても触れながら，手順や使われる試薬などが
　「何ための手順なのか？」「その試薬にどんな効果があるのか？」が分かるように，でもなるべく簡潔に記述してください。




　2）　逆転写反応による cDNA 合成へ

　3）　RT-PCRへ



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